Остаточная сумма квадратов отклонений
Точка пересечения с осью ординат, a
Тангенс угла наклона прямой (наклон), b
Коэффициент корреляции
Сумма площадей пиков гомологов, S
Концентрация испытуемого раствора, С (мг/мл)
Концентрация испытуемого раствора, %
Таблица 1. Соблюдение линейности в диапазоне применения методики
Время удерживания пиков гомологов бензалкония хлорида совпадает со временем удерживания пиков на хроматограмме раствора стандартного образца, раствор плацебо не имеет пиков в момент выхода пиков бензалкония хлорида. Таким образом доказано, что ни используемый растворитель, ни подвижная фаза, ни компоненты плацебо, ни примеси не искажают результат количественного определения.Определение линейности проводили на пяти уровнях концентраций от номинального содержания бензалкония хлорида в препарате (в диапазоне от 80% до 120%) путем хроматографирования растворов, полученных разведением раствора стандартного образца. Критерий приемлемости: коэффициент корреляции должен быть не менее 0,99 .При статистической обработке линейной зависимости полученных значений сумм площадей пиков гомологов бензалкония хлорида от концентрации по уравнению типа y = bx+a коэффициент корреляции линейного регрессионного графика – 0,996. На основании полученных результатов (таблица 1) можно утверждать о соблюдении линейности в диапазоне применения методики (80 % - 120 %).
Рис. 1 Хроматограммы растворов плацебо (а) и стандартного образца бензалкония хлорида (б)
В ходе разработки методики были подобраны условия хроматографирования, позволяющие добиться хорошего разрешения между пиками гомологов бензалкония хлорида (не менее 8). Четкое разделение пиков позволяет надежно определять консервант в препарате Аква-риносоль, спрей назальный.Изучение разработанной методики проводилось по таким валидационным характеристикам, как специфичность, линейность и диапазон применения, правильность, прецизионность (сходимость и внутрилабораторная прецизионность) . Протокол валидации с установленными критериями приемлемости был разработан в соответствии с утвержденными правилами и рекомендациями .Хроматограммы, подтверждающие специфичность, представлены на рис. 1:
Результаты и их обсуждение
S0 — сумма площадей двух основных пиков на хроматограмме раствора СО бензалкония хлорида;S1 — сумма площадей двух основных пиков бензалкония на хроматограмме препарата; а0 – навеска СО бензалкония хлорида, г;A – содержание бензалкония хлорида в СО бензалкония хлорида на безводное вещество, %;W – содержание воды в СО бензалкония хлорида, %.Содержание бензалкония хлорида {С6Н5СН2N(СН3)2RСl (R = от С8Н17 до С18Н37)} в 1 мл препарата должно быть от 0,0001275 г до 0,0001725 г.Хроматографическая система считается пригодной, если при хроматографировании раствора СО бензалкония хлорида: разрешение между двумя основными пиками бензалкония – не менее 8; относительные стандартные отклонения результатов отдельных измерений времен удерживания и площадей пиков бензалкония не превышают 2,0%.Для обеспечения пригодности хроматографической системы допускается изменение содержания ацетонитрила в ПФ. Время удерживания двух основных пиков бензалкония – около 6 и 11 мин.Валидацию методики количественного определения бензалкония хлорида методом ВЭЖХ проводили в соответствии с установленными требованиями на образцах препарата и модельных смесях, полученных в лабораторных условиях из компонентов препарата, соответствующих требованиям нормативных документов для входного контроля качества .
Последовательно хроматографируют по 10 мкл препарата и раствора СО бензалкония хлорида не менее чем в 3-х повторностях.Условия хроматографирования: жидкостной хроматограф с изократическим режимом подачи подвижной фазы (ПФ); колонка размером 4,6 х 250 мм, заполненная сорбентом Luna С18(2) с размером частиц 5 мкм или аналогичная; ПФ: фосфатный буферный раствор (6,8 г калия фосфорнокислого однозамещенного и 0,961 г пентансульфокислоты натриевой соли моногидрата в 1000 мл воды) – ацетонитрил (35 : 65); температура колонки: от 20 до 24 0С; объем пробы: 10 мкл; скорость потока 1,2 мл/мин. Детектирование проводят при длине волны 210 нм.Содержание бензалкония хлорида в 1 мл препарата вычисляют по формуле:
Методика количественного определения бензалкония хлорида в лекарственном препарате Аква-Риносоль.
В настоящее время постоянно ужесточаются требования к качеству лекарственных средств (ЛС), в первую очередь это относится к испытаниям по показателям, связанным с терапевтической эффективностью препарата и его безопасностью. В связи с этим становится понятной необходимость контроля количественного содержания не только активных веществ, но и консервантов в готовых лекарственных формах. Учитывая, что консерванты вводятся в небольших количествах, возникает проблема особо тщательного соблюдения точности их введения, а для этого необходимо разрабатывать специальные методики для контроля содержания.Одним из современных требований к аналитической методике является доказательство валидности, т.е. гарантии, что разработанная методика обеспечивает воспроизводимые и достоверные результаты .Целью настоящей статьи является разработка методики количественного определения бензалкония хлорида в препарате Аква-Риносоль методом ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) и валидация разработанной методики.В качестве объекта исследования использовали разработанный ООО «Фирма «ВИПС-МЕД» лекарственный препарат Аква-риносоль спрей назальный 0,65 %. Препарат помещен в прозрачный стеклянный флакон емкостью 20 мл с диаметром горла 20 мм, укупоренный обжимным микроспреером с распыляющей назальной насадкой и защитным колпачком. Такая конструкция обеспечивает компактность и удобство при хранении и транспортировке, удобство в использовании. Кроме того, прозрачный флакон позволяет контролировать качество препарата визуально.В работе использовали субстанцию натрия хлорида, произведенную ОАО «Востоквит» в соответствии с требованиями, предъявляемыми к субстанциям для изготовления лекарственных форм для инъекций, субстанции бензалкония хлорида (Fluka), калия дигидрофосфата (Merck), натрия гидрофосфата додекагидрата (Panreac), соответствующие требованиям монографий Европейской фармакопеи, стандартные образцы бензалкония хлорида (USP RS). Воду очищенную получали с помощью двухступенчатой установки обратноосмотической фильтрации.Аналитические испытания методом ВЭЖХ проводили на хроматографе фирмы «Gilson» следующей комплектации: насос 305 фирмы «Gilson», инжектор 7125 с петлей 10 мкл фирмы «Реодайн», детектор Waters 481 (США).
М.М.Губин, Г.В.Азметова, С.В.Пивоварова
» » Валидация методик определения бензалкония хлорида
Валидация методик определения бензалкония хлорида
Валидация методик определения бензалкония хлорида | ВИПС-МЕД
Комментариев нет:
Отправить комментарий